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尔首发布高效液相色谱分离中药制剂(常通口服液)中大黄素和大黄酸的方法

杭州尔首科学仪器有限公司2013年5月21日 16:55 点击:1099

1 仪器和试剂
        ,。甲醇(色谱纯),水为重蒸馏水,其它试剂为分析纯。大黄酸对照品(供含量测定用,批号0757-9804)由中国药品生物制品检定所提供。样品常通口服液为南方医院药学部试制。

2 色谱条件
         (150×4.6mm, 5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液85:15,检测波长为254nm,流速为1ml·min-1。温度:室温20℃。在此条件下,大黄酸的保留时间约12min,与其它峰分开。大黄酸对照品、常通口服液的高效液相色谱图见图1、2。图1 大黄酸标准品HPLC色谱图 图2 常通口服液HPLC色谱图3 线性关系考察,精密称取大黄酸对照品0.00402g,置100ml量瓶中,加甲醇至刻度,制得对照品储备液,取储备液适量,加流动相制成1ml含201、4.02、8.04、12.06、20.10、40.20μg的对照品系列溶液,各依法进样20μl,按上述色谱条件进行测定。以大黄酸对照品浓度X为纵坐标,峰面积Y(μg)为横坐标,绘制标准曲线。线性回归方程为:Y=9.534×10-6X+0.1934,相关系数r=1.0000。说明进样量在0.0402-0.804μg范围内,对照品浓度与峰面积呈线性关系。

3 对照品溶液与供试品溶液的制备
        对照品溶液的制备:精密移取大黄酸对照品储备液适量,加流动相稀释为浓度为8.04μg/ml对照品溶液。
        供试品溶液的制备:精密移取常通口服液10ml,加入1ml0.8%的磷酸溶液,加入甲醇定容至20ml,摇匀,离心10min,取上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即为供试品溶液。
        空白溶液的制备:取除大黄的药味按同一工艺制成的缺大黄空白样品0.2ml,按供试品溶液制备方法操作,即得。

4 精密度实验
        精密吸取8.04μg/ml的对照品溶液10μl,注入高效液相色谱仪,连续测定5次,大黄酸的平均峰面积为831543,RSD=0.18%(n=5)。表明结果精密度良好。

5 稳定性试验
         精密吸取室温保存的同一对照品溶液10μl,同法每间隔一定时间进样测定,共5次,结果表明供试品溶液在7天内无明显变化,表明此对照品基本稳定, RSD=0.49%.

6 重复性试验
         取同一批常通口服液6份各10ml,依法测定,结果大黄酸含量的平均值为165.62,RSD=2.15%(n=6)。说明方法重复性较好.

7 回收率试验
         精密吸取已知含量的常通口服液10ml,精密加入3ml大黄酸对照品储备液(每1ml含大黄酸8.04μg),按供试品溶液制备法制备,依法测定,结果见表1。样品平均回收率98.84%,RSD=0.86%(n=6)
表1 常通口服液中大黄酸加样回收率试验结果
试验号 已知含量 测得量 回收率 平均值 RDS
/μg /μg /% /% /%
1 284.52 98.45
2 283.89 97.93
3 284.89 98.76
4 165.79 285.24 100.41 98.84 0.86
5 286.89 99.05
6 284.52 98.45
注:对照品加入量120.60μg

8 样品的测定
        分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl,注入高效液相色谱仪测定,样品测定结果见表2.
表2 样品测定结果(n=3)
序号 批号 大黄酸含量(μg/ ml)
1 20010810 3973.39
2 20010904 3151.95
3 20011121 2136.80

9 讨论
测定常通口服液中大黄酸的含量

[摘要] 目的:建立常通口服液中大黄酸的含量测定方法。方法:采用高效相色谱法,使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液64:36,检测波长为230nm。结果:此方法线性关系良好,平均加样回收率98.84%,RDS为0.86%。结论:方法简便可靠,精密度高,分离度好,可用于常通口服液的质量控制。

        常通口服液为我院研制的中药制剂。具有益气化淤,行气通腑的功能,用于腹部外伤或腹部手术后腹膜粘连。处方中大黄为君药,大黄酸(C15H8O6)具有抗菌抗癌、导泻利尿的作用,是其功效成分之一。因此,选此成分的含量测定为质量控制标准。
        因供试品色谱有较多的杂质峰,要求较高的柱效,因而理论板数定为按大黄酸峰计算应不低于5000。
        该方法简便可靠、精密度高, 分离度好,可用于常通口服液的质量控制。


[关键词] 大黄酸 含量测定 中药制剂 大黄素检测

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(来源: 杭州尔首科学仪器有限公司


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