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ELISA试剂盒包被和封闭的几个必要条件

上海谷研实业有限公司2014年7月29日 16:49 点击:840

                            ELISA试剂盒包被和封闭的几个必要条件

    最常用的封锁剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封锁剂的。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。ELISA试剂盒抗原或抗体包被时所用的浓度较低,吸收后固相载体表面尚有未被占据的旷地空闲,封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲,从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。

    包被用抗原或抗体的浓度,包被的温度和时间,包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置过夜,37℃中保温2小时被以为具有平等的包被效果。特别是用单抗腹水直接包被时,因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面,业已起到了类似封锁剂的作用。并非所有的ELISA固相均需封锁,封锁不当反而会使阴性本底增高。ELISA试剂盒脱脂奶粉也是一种良好的封锁剂,其最大的特点是价廉,可以高浓度使用(5%)。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。

  高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封锁剂使用,但因为奶粉的成份复杂,而且封锁后的载体不易长期保留,因此在试剂盒的制备中较少应用。ELISA试剂盒封锁的手续与包被相类似。一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操纵时洗涤彻底,不经封锁也可得到满足的结果。封锁是否必要,取决于ELISA的模式及详细的实验前提。

  封锁(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或锡袋中,在低温可保留数月。ELISA试剂盒包被的最适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化,每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。但在间接法测定中,封锁一般是不可少的。

(来源: 上海谷研实业有限公司


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