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推出IL-17 ELISA试剂盒

嘉美生物技术有限公司2009年10月12日 12:49 点击:1942

IL-17是新近被确认的一种细胞因子,在细胞抵御细菌和真菌感染以及自身免疫病中扮演了重要的角色。由T细胞,主要是CD4+T细胞产生,其靶细胞广泛。可激活转录因子NF-KB,诱导纤维母细胞产生IL-6、ID8、GM-CSF、和膜性细胞间粘附分子1(ICAM-1),促进由亚适剂量PHA所诱导的T细胞增殖。目前编码IL-17及其受体的基因核苷酸序列已被部分测定。
 
    (1)IL-17的诱导:取人PBMC或纯化的CD4+T细胞,加入诱导剂(PMA 5ng/mL+ionomycin 3ug/mL,或ConA 63ug/mL,或抗CD28抗体+CD3抗体),37℃孵育48—72h。收集培养上清液检测IL-17含量(ELISA法)或生物学活性。
 
    (2)IL-17生物学活性检测:通过诱导类风湿性关节炎滑膜细胞或肾癌上皮细胞株(TUMT或CHA)产生IL-6、IL-8或GM-CSF可以检测IL-17的活性。
 
    1)滑膜细胞的制备:外科切取关节滑膜,剪碎后用4ug/mL胶原酶消化,37~C孵育2~3h,单个细胞悬液用培养液培养。细胞贴壁后,洗去未粘附细胞。待细胞生长至汇合,用胰蛋白酶消化传代。一般采用3—8代的滑膜成纤维样细胞作为检测用靶细胞。
 
    2)取96孔细胞培养板,每孔依次加人104滑膜细胞或是TUMT细胞(或CHA细胞),不同稀释度的IL-17待测样品,总体积为200uL,置370(2 5%C02温箱中孵育48h,收集上清,置-20℃保存以备检测细胞因子活性。用ELISA法或生物学活性测定法检测上清液中的II-6、IL-8或GM-CSF等细胞因子的含量或活性,以此推测IL-17的活性。

 

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(来源: 嘉美生物技术有限公司


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