不用本金就能赚钱的方法

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药研好帮手--蛋白质表达系统

北京百奥赛图基因生物技术有限公司2019年12月30日 10:08 点击:124

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大肠杆菌(E.coli)表达系统

 

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哺乳动物细胞表达系统

 

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1、瞬时表达系统是指以外源基因导入宿主细胞(转染)为基础,在有限的时间内表达的技术。转染后,质粒DNA分子留在细胞内,不整合到基因组中,最终随着时间的推移和细胞分裂而丢失。在抗体上清收获之前,抗体上清的制备生产通常限于转染后7-14天,时间比较短暂。瞬时表达系统的优势是操作过程简捷,实验周期短。另一个显著的优势是瞬时表达的灵活性。只有改变质粒DNA中包含的目的基因,就可以表达几种蛋白质,灵活性比较高。这些优势让瞬时表达系统在抗体药物早期的高通量筛选流程中承担了很重要的角色。当目的蛋白或者抗体由于毒性问题而不能让细胞持续表达时,瞬时表达也是一种合适的选择[1,2]。此外,瞬时表达可以从非常小的规模(96孔板)[3]扩大到大容量培养容器中(生物反应器中的数百升)[4]


 

图1.瞬时转染元件[5]


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图2.稳转细胞系构建流程[6]

 

生物医药界“糖宝”-CHO


1957年美国科罗拉多大学的Puck教授从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得一种上皮贴壁型细胞,并建立了首批CHO细胞系,为命名为CHO-K1细胞系,是目前在生物领域中广泛使用的细胞系[7]。,此后建立了许多不同的细胞系,如CHO-S、CHOK1SV、DG44等[8]


 

图3.CHO细胞发展[9]


1、CHO细胞的应用优势


不用本金就能赚钱的方法那么为什么CHO细胞这么受大家的喜爱呢?不仅是因为为它具有稳定传代不死的性质,它还具有下面几大优势,让新药研发行业的同仁们对它爱不释手。

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2、改善CHO细胞的表达水平

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针对于转染效率、生产力和生长特性,很多产品公司对CHO细胞进行改造及优化,目前被应用CHO-S细胞系,商品名为ExpiCHO-STM。ExpiCHO-S细胞经悬浮培养后,呈最小的聚集趋势,在表达培养基中呈高密度生长,能显著提升瞬时表达的产量和效率。稳定的细胞系表达能力,稳定的产品质量和较高的产率,CHO细胞表达系统已成为生物制药工业中制备大量蛋白质的首选方法。相信在不久的将来,有更多高质量的重组mAb通过CHO细胞制备出来。

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CANKAOZILIAO:

[1] Nallet S, Amacker M, Westerfeld N, et al. Respiratory syncytial virus subunit vaccine based on a recombinant fusion protein expressed transiently in mammalian cells. Vaccine. 2009;27:6415–6419.

[2] Mignaqui AC, Ruiz V, Perret S, et al. Transient gene expression in serum-free suspension-growing mammalian cells for the production of foot-and-mouth disease virus empty capsids. PLoS One. 2013;8:1–9.

[3] Raymond C, Tom R, Perret S, et al. A simplified polyethylenimine-mediated transfection process for largescale and high-throughput applications. Methods. 2011;55:44–51.

不用本金就能赚钱的方法[4] Tuvesson O, Uhe C, Rozkov A, et al. Development of a generic transient transfection process at 100 L scale. Cytotechnology. 2008;56:123–136.

[5] Gutiérrez-Granados S, Cervera L, Kamen AA, et al. Advancements in mammalian cell transient gene expression (TGE) technology for accelerated production of biologics. Crit Rev Biotechnol. 2018 Sep;38(6):918-940.

[6] Lai T1, Yang Y, Ng SK. Advances in Mammalian Cell Line Development Technologies for Recombinant Protein Production. Pharmaceuticals (Basel). 2013 Apr 26;6(5):579-603. 

[7] PUCK TT. The genetics of somatic mammalian cells. Adv Biol Med Phys. 1957;5:75-101.

不用本金就能赚钱的方法[8] Stolfa G1, Smonskey MT, Boniface R. CHO-Omics Review: The Impact of Current and Emerging Technologies on Chinese Hamster Ovary Based Bioproduction. Biotechnol J. 2018 Mar;13(3):e1700227. 

[9] Lewis NE, Liu X, Li Y, et al. Genomic landscapes of Chinese hamster ovary cell lines as revealed by the Cricetulus griseus draft genome. Nat Biotechnol. 2013 Aug;31(8):759-65. 
 


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(来源: 北京百奥赛图基因生物技术有限公司


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