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超声波测厚仪的使用及方法

上海隆拓仪器设备有限公司2011年2月21日 14:47 点击:1303

RNA的结构学研究,比如X射线晶体衍射或者核磁共振(NMR),都需要制备毫克级的高纯度RNA。

英国剑桥医学研究委员会分子生物学实验室的Laura Easton等开发出一种快速、大规模纯化结构上均一的RNA的新方法。这种方法利用的是弱阴离子交换层析,它省略了上述这些繁琐的步骤,更快速地纯化大量RNA。文章发表在《RNA》杂志上。

整个过程如下:利用T7 RNA聚合酶对线性的质粒DNA进行转录之后,加入EDTA终止反应,并直接上样到DEAE-Sepharose FPLC柱上。最初的流出液含有T7 RNA聚合酶及rNTP。之后一次洗脱出短的中断转录本、期望得到的RNA和质粒DNA。RNA的纯度和均一性由分子排阻层析来验证,而蛋白凝胶电泳证实了纯化的RNA中不含T7 RNA聚合酶。

RNA的大量合成一般是利用T7 RNA聚合酶对DNA模板进行体外转录,不过随后的纯化非常困难且耗时。利用高速液相层析系统(FPLC)的分子排阻层析能够从RNA产物中有效去除未掺入的NTP、中断的小转录本及模板DNA,但是需要多个准备步骤,如酚/氯仿抽提,以去除T7 RNA聚合酶,以及脱盐和样品浓缩。

 

(来源: 上海隆拓仪器设备有限公司


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