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CSB-E07966m(中英文)小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA Kit使用说明书

厦门慧嘉生物科技有限公司2013年5月17日 17:03 点击:1023

Mouse Prostaglandin E2 (PGE2)
ELISA Kit 
 
 
 
 
  This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of mouse
PGE2 concentrations in serum, plasma and other biological fluids.
  Expiration date      six months from the date of manufacture
  FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
 
 
 
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INTRODUCTION
One  of  the  prostaglandins,  a  group  of  hormone-like  substances  that
participate  in a wide  range of body  functions such as  the contraction and
relaxation of smooth muscle, the dilation and constriction of blood vessels,
control  of  blood  pressure,  and modulation  of  inflammation. Prostaglandin
E2  (PGE-2)  is  released  by  blood  vessel walls  in  response  to  infection or
inflammation that acts on the brain to induce fever. The enzyme mPGES-1
is  involved  in  the  production  of  PGE2  and  is  an  important  "switch"  for
activating the fever response.
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The  microtiter  plate  provided  in  this  kit  has  been  pre-coated  with  an
goat-anti-rabbit  antibody.  Standards  or  samples  are  then  added  to  the
appropriate  microtiter  plate  wells  with  a  HRP-conjugated  PGE2  and
antibody  preparation  specific  for  PGE2  and  incubated.  Then  substrate
solutions  are  added  to  each  well.  The  enzyme-substrate  reaction  is
terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change
is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The
concentration of PGE2 in the samples is then determined by comparing the
O.D. of the samples to the standard curve.
DETECTION RANGE
0.32  pg/ml-80  pg/ml.  The  standard  curve  concentrations  used  for  the
ELISA’s were 80 pg/ml, 20 pg/ml, 5 pg/ml, 1.24 pg/ml, 0.32 pg/ml. 
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SPECIFICITY
This  assay  recognizes  recombinant  and  natural  mouse  PGE2.  No
significant cross-reactivity or interference was observed.
SENSITIVITY
The minimum  detectable  dose  of mouse PGE2  is  typically  less  than  0.2
pg/ml.
The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection (LLD) was defined
as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero.
MATERIALS PROVIDED
Reagent      Quantity
Assay plate  1
Standards (S1-S5)  5 x 0.5 ml  
HRP-conjugate  1 x 6 ml
Antibody    1 x 6 ml
Wash Buffer      
1 x 15 ml
  (20×concentrate)
Substrate A  1 x 7 ml
Substrate B  1 x 7 ml
Stop Solution      1 x 7 ml
Standard  S 1  S 2  S 3  S 4  S 5
Concentration
(pg/ml)
0.32  1.24  5  20  80 
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STORAGE
1.  Unopened  test  kits  should  be  stored  at  2-8°C  upon  receipt  and  the
microtiter plate should be kept in a sealed bag. The test kit may be used
throughout the expiration date of the kit. Refer  to  the package  label for
the expiration date.
2.  Opened  test  kits  will  remain  stable  until  the  expiring  date  shown,
provided it is stored as prescribed above.    
3.  A  microtiter  plate  reader  with  a  bandwidth  of  10  nm  or  less  and  an
optical  density  range  of  0-3  OD  or  greater  at  450nm  wavelength  is
acceptable for use in absorbance measurement.
TECHNICAL HINTS
1.  Bring all reagents and plate to room temperature for at least 30 minutes
before use. Unused wells need store at 2-8℃and avoid sunlight.
2.  Wash Buffer    If crystals have formed in the concentrate, warm to room
temperature and mix gently until the crystals have completely dissolved.
Dilute 15 ml of Wash Buffer Concentrate into deionized or distilled water
to prepare 300 ml of Wash Buffer.
3.  To avoid cross-contamination, change pipette tips between additions of
each  standard  level, between  sample additions, and between  reagent
additions. Also, use separate reservoirs for each reagent.
4.  When  using  an  automated  plate  washer,  adding  a  30  second  soak
period following the addition of wash buffer, and/or rotating the plate 180
degrees between wash steps may improve assay precision. 
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5.  To  ensure  accurate  results,  proper  adhesion  of  plate  sealers  during
incubation steps is necessary. Sealers can not be reused.
6.  Substrate  Solution  should  remain  colorless  until  added  to  the  plate.
Keep Substrate Solution protected from light. Substrate Solution should
change from colorless to gradations of blue.
7.  Stop Solution  should  be  added  to  the  plate  in  the  same  order  as  the
Substrate Solution. The color developed in the wells will turn from blue
to  yellow  upon  addition  of  the  Stop  Solution. Wells  that  are  green  in
color  indicate  that  the Stop Solution has not mixed  thoroughly with  the
Substrate Solution.
Precaution: The Stop Solution provided with  this kit  is an acid solution. Wear
eye, hand, face, and clothing protection when using this material.
OTHER SUPPLIES REQUIRED
  Microplate  reader  capable  of measuring  absorbance  at  450  nm, with
the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.
  Pipettes and pipette tips.
  Deionized or distilled water.
  Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate washer.
SAMPLE COLLECTION AND STORAGE
  Serum    Use a serum separator  tube (SST) and allow samples  to clot
for 30 minutes before centrifugation for 15 minutes at 1000 x g. Remove
serum and assay  immediately or aliquot and store samples at  -20° C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles. 
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  Plasma    Collect  plasma  using  citrate,  EDTA,  or  heparin  as  an
anticoagulant. Centrifuge for 15 minutes at 1000 g within 30 minutes of
collection. Assay  immediately  or  aliquot  and  store  samples  at  -20°C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
  Cell Culture Supernates    Remove particulates by centrifugation and
assay  immediately  or  aliquot  and  store  samples  at  -20°  C.  Avoid
repeated freeze-thaw cycles.
Note: Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.
ASSAY PROCEDURE
Bring all reagents and samples to room temperature before use. It is
recommended that all samples, standards, and controls be assayed in duplicate.
1.  Set a Blank well without any solution. Add 50µl of Standard or Sample
per well. Standards need test in duplicate.  
2.  Add 50µl of HRP-conjugate  to each well (not  to Blank well),  then add
50µl Antibody  to each well. Mix well and  then  incubate  for 1 hour at
37°C.  
3.  Fill each well with Wash Buffer (about 200µl), stay for 10 seconds and
Spinning.  Repeat  the  process  for  a  total  of  three  washes.  Complete
removal of  liquid at each step  is essential  to good performance. After
the  last  wash,  remove  any  remaining Wash  Buffer  by  aspirating  or
decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.
4.  Add  50µl  of  Substrate  A  and  Substrate  B  to  each  well,  mix  well.
Incubate  for 15 minutes at 37°C. Keeping  the plate  away  from drafts
and other temperature fluctuations in the dark. 
  7
5.  Add  50µl  of  Stop  Solution  to  each  well.  If  color  change  does  not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
6.  Determine  the optical density of each well within 10 minutes, using a
microplate reader set to 450 nm.
CALCULATION OF RESULTS
Average  the duplicate readings  for each standard, Blank, and sample and
subtract  the optical density of Blank. Create a standard curve by reducing
the data using computer software capable of generating a  four parameter
logistic  (4-PL)  curve-fit. As  an  alternative,  construct  a  standard  curve  by
plotting  the mean absorbance  for each standard on  the y-axis against  the
concentration on the x-axis and draw a best fit curve through the points on
the  graph.  The  data may  be  linearized  by  plotting  the  log  of  the  PGE2
concentrations  versus  the  log  of  the  O.D.  and  the  best  fit  line  can  be
determined  by  regression  analysis.  This  procedure  will  produce  an
adequate but less precise fit of the data. If samples have been diluted, the
concentration  read  from  the  standard  curve  must  be  multiplied  by  the
dilution factor.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
  The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.
  Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.
  It is important that the Calibrator Diluent selected for the standard curve
be consistent with the samples being assayed.
  If samples generate values higher than the highest standard, dilute the
samples with the appropriate Calibrator Diluent and repeat the assay. 
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  Any  variation  in  Standard  Diluent,  operator,  pipetting  technique,
washing  technique,  incubation  time  or  temperature,  and  kit  age  can
cause variation in binding.
  This assay  is designed  to eliminate  interference by soluble  receptors,
binding proteins, and other  factors present  in biological samples. Until
all  factors  have  been  tested  in  the  Quantikine  Immunoassay,  the
possibility of interference cannot be excluded.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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小 小小 小鼠前列腺素 鼠前列腺素 鼠前列腺素 鼠前列腺素 E2(PGE2)快速检测试剂盒 快速检测试剂盒 快速检测试剂盒 快速检测试剂盒
使用说明书 使用说明书 使用说明书 使用说明书
本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用
产品编号 产品编号 产品编号 产品编号:CSB-E07966m
检测范围 检测范围 检测范围 检测范围: :: :0.32 pg /ml -80 pg /ml
最低检测限 最低检测限 最低检测限 最低检测限: :: :0.2 pg/ml
特异性 特异性 特异性 特异性: :: :本试剂盒可同时检测天然或重组的 PGE2,且与其他相关蛋白基
本无交叉反应。
有效期 有效期 有效期 有效期:6 个月(2-8℃避光保存)
预期应用 预期应用 预期应用 预期应用: :: : ELISA法定量测定小鼠血清,血浆及其它相关生物液体中PGE2
含量。
说明 说明 说明 说明  
1.  浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。  
2.  刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实
验结果造成任何影响。
实验原理 实验原理 实验原理 实验原理
采用竞争酶联免疫法检测 PGE2 含量。首先用羊抗兔包被微孔板,制备
成固相二抗,然后加入待测标本、辣根过氧化物酶标记 PGE2 以及抗 PGE2
抗体,使之形成包被二抗-抗 PGE2 抗体-  PGE2(HRP)复合物。经显色后
在酶标仪测定吸光值(OD值),通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线,反
算出待测标本中 PGE2含量。 
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试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制  
1.  酶联板 酶联板 酶联板 酶联板(Assay plate ):                                                              一块 (96孔)。   
2.  标准品 标准品 标准品 标准品 (Standard):                                                                     5×0.5ml/瓶。 
Standard 1  Standard 2  Standard 3  Standard 4  Standard 5
0.32pg/ml  1.24pg/ml  5 pg/ml  20 pg/ml  80 pg/ml
3.  酶结合物 酶结合物 酶结合物 酶结合物( (( (HRP-conjugate) )) ):                                                      1×6ml/瓶。 
4.  抗体 抗体 抗体 抗体( (( (Antibody) )) )                                                                            1×6ml/瓶。 
5.  显色剂 显色剂 显色剂 显色剂 A ( (( (Substrate A):                                                               1×7ml/瓶。 
6.  显色剂 显色剂 显色剂 显色剂 B ( (( (Substrate B):                                                               1×7ml/瓶。 
7.  浓洗涤液 浓洗涤液 浓洗涤液 浓洗涤液( (( (Wash Buffer) )) ):1×15ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 20 倍。   
8.  终止液 终止液 终止液 终止液( (( (Stop Solution) )) ):                                                              1×7ml/瓶。 
需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材
1.  标准规格酶标仪
2.  高速离心机
3.  电热恒温培养箱
4.  干净的试管和 Eppendof 管
5.  系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6.  蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存 标本的采集及保存 标本的采集及保存 标本的采集及保存
1.  血清:全血标本请于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000 x g离心 20 分
钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻
融。
2.  血浆:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C
1000 x g离心 15 分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复
冻融。
3.  细胞培养物上清:离心后取上清,上清立即用于实验,或分装后于-20°C
保存。避免反复冻融。
注 注注 注: :: :以上标本置 以上标本置 以上标本置 以上标本置 4℃ ℃℃ ℃保存应小于 保存应小于 保存应小于 保存应小于 1 周 周周 周, ,, ,-20℃ ℃℃ ℃或 或或 或-80℃ ℃℃ ℃均应密封保存 均应密封保存 均应密封保存 均应密封保存, ,, ,-20℃ ℃℃ ℃不应超过 不应超过 不应超过 不应超过 1 个 个个 个
月 月月 月, ,, ,-80℃ ℃℃ ℃不应超过 不应超过 不应超过 不应超过 2 个月 个月 个月 个月; ;; ;标本溶血会影响最后检测结果 标本溶血会影响最后检测结果 标本溶血会影响最后检测结果 标本溶血会影响最后检测结果, ,, ,因此溶血标本不宜进行 因此溶血标本不宜进行 因此溶血标本不宜进行 因此溶血标本不宜进行检 检检 检
测 测测 测。 。。 。 
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操作步骤 操作步骤 操作步骤 操作步骤
1.  将各种试剂至室温〔18-25℃〕平衡半小时,取浓缩洗涤液,根据当批检
测数量,用蒸馏水上 1:20 稀释,混匀后备用。
2.  将酶标板取出,设一个空白对照孔、不加任何液体;每个标准点依次各设
两孔,每孔加入相应标准品 50ul;其余每个检测孔直接加待测标本 50ul。   
3.  每孔加入酶结合物 50ul(空白对照孔除外),再按同样的顺序加入抗体
50ul,充分混匀,贴上不干胶封片,置 37℃温育 1 小时。
4.  手工洗板,弃去孔内液体。洗涤液注满各孔,静置 10 秒甩干,重复三次
后拍干;洗板机洗板,选择洗涤三次程序,洗板后拍干。
5.  每孔加显色剂 A 液 50µl,显色剂 B 液 50µl,振荡混匀后,37℃避光显色
15 分钟,每孔加终止液 50µl。
6.  用酶标仪读数,取波长 450nm,先用空白孔调零点,然后测定各孔 OD
值。
数据处理 数据处理 数据处理 数据处理
1.  手工作图:用双对数坐标纸,以标准品浓度为横轴,以对应的 0D值为纵
轴,画出平滑曲线或直线,在曲线上按照待测血清 OD值找到对应的浓度
值。
2.  计算机:使用线性拟合功能,应将标准品 S1-S5 的浓度取对数(Log(浓
度))作为 X,将对应的 OD值减去空白对照孔 OD值后取对数(Log(OD
值-NSB))作为 Y,进行线性拟合。再从拟合线上计算出待测血清浓度。
注意事项 注意事项 注意事项 注意事项
1.  从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及所需预包被板条应置室温
(18-25℃)平衡 30 分钟后方可使用,余者应及时封好口,放回 2-8℃中避
光保存,以备后用。
2.  使用前试剂应摇匀。
3.  结果判断须在反应终止后 10 分钟内完成。
4.  不同批号的试剂不可混用。
5.  加样时应注意避免所用各试剂及样品之间的交又污染。
6.  操作时,试剂盒内每种试剂各使用一个吸头,每一种标准品使用一个吸头,
每一个样品各使用一个吸头,吸头最好一次性使用。        
 

(来源: 厦门慧嘉生物科技有限公司


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