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专家指南:FISH检测之经验谈

基因科技2013年5月22日 9:47 点击:1850


 

宋兰林老师是广州市南方医院的血液科医生,从事FISH实验已有9年时间,积累了丰富的实践经验,这里,她将向我们介绍科室开展FISH实验的情况和她自己的工作心得。

Q:宋老师您好,谢谢您接受我们的访问!请问宋老师从事FISH实验多久了?
A:从2000年到现在,有9年了。

Q:请问宋老师主要做哪些方面的FISH实验呢?
A:主要是血液病方面和产前诊断方面,基本上是间期细胞的FISH检测。

Q:现在每周大概做多少例FISH?
A:每周差不多十几例,包括血液病和产前检测各种类型的都有。

临床应用方面

Q:血液病方面,科室一般对那些病人进行FISH检测?
A:一般诊断为初发白血病,而且有相应探针的,我们都会进行FISH检测。病人初诊为白血病后,我们医院一般要通过4类检查来确定诊断,包括细胞形态学、流式细胞免疫分型、荧光定量PCR、核型和FISH检查。其中FISH和核型检查都是检查细胞染色体变异,我们一般会把两种方法配合一起做。另外FISH也拿来做病程疗效检测用。

Q:一般FISH诊断哪些疾病比较多呢?
A:这都根据病人初诊类型来的,各式各样的都有,一般来说白血病我们用BCR/ABL探针的比较多,产检的话就是常见5种染色体正常。

Q:FISH技术和核型检查为什么要一起做呢?
A:核型技术有它的缺点,像检查需要培养细胞,时间比较长,要3周才能出结果,而且对一些微缺失、断裂点的变异可能就完全看不见,FISH只要3天就能出结果,而且对这些微缺失、断裂点的检测比较有效,检测质量也比较稳定。另外FISH在结果判断上也很明确,有固定的标准。

Q:能不能只做FISH,不做核型检查?
A:目前不行,因为FISH的探针有限,还不能包括所有情况,而且相对FISH,核型检查比较便宜,我们医院一般都是两个一起做。

Q:FISH检测的结果和其它方法检测的结果一致性好不好?
A:挺好的,一般都没什么问题。有时候骨髓形态方面结果不肯定还要来参考我们的检查结果。我们在初发诊断和病程监控都会用到FISH。

Q:FISH检测难度大不大?一般医院容易开展吗?会不会出现做不出结果的情况?
A:FISH这个技术操作是比较简单的,只要有硬件条件,看一次就可以自己回去做了,当然做的过程中碰到问题就要凭经验来解决了,但总的来说不难学。

Q:宋老师你觉得FISH技术应用前景怎么样?好不好普及?
A:FISH这个技术是很好的,学起来也不难,现在的主要问题是价格相对核型检查还比较贵,可能有些人接受起来经济压力比较大,不过有些病人我们尽量推荐他做,毕竟这个结果很有用的,像现在我们医院很多白血病和产检有问题的我们都会建议他做FISH。

硬件配备方面

Q:做FISH的话,硬件方面有什么要求?
A:硬件方面,显微镜要好,要配冷光源CCD的显微镜,这样信号才清楚,另外要配好的图像分析系统,这两样配好后读片子就很容易。另外实验的时候最好用杂交仪做,像我们科室刚开展FISH的时候我就坚持用杂交仪的,这个要比用甲酰胺变性好很多,而且快速安全。

Q:我听说有的老师喜欢在镜下直接读片子?那是在镜下观察好还是在计算机上好?
A:我觉得镜下分析后,再通过CCD采集图像处理更加准确,因为CCD的敏感性肯定比人眼要高啊,可以防止漏掉一些较弱的信号。当然你一定配一个好一点的冷光源CCD,再加上好的图像分析系统的话就能得到一个完美的结果。

Q:宋老师你们这里都是用杂交仪做,但有的地方没有杂交仪也可做FISH,您觉得杂交仪作用大不大?
A:杂交仪还是很重要的,因为变性这个步骤就很重要,如果变性不好就根本杂交不上了,另外你不用杂交仪还要用甲酰胺,这个东西有毒,而且100ml一瓶快200块,用完就扔了,也划不来,最后还有你手工变性第二天甲酰胺洗片的话实验就拖得很长,要很晚才下班。

 

Q:FISH实验中间有哪些要注意的地方?
A:一般来说都不难,可能有几个地方要注意一点,像标本制片的时候就要注意一定要低渗好,然后固定的时候注意细胞要固定干净,探针方面一般没什么问题,但杂交变性的时候一定要充分,不然杂交不上,不过我们一直都是用杂交仪自动变性杂交,所以这方面一般不出问题。最后相应试剂的质量很重要,一定要配好,pH值和离子浓度方面都要注意。

Q:探针方面容易出问题吗?毕竟探针价格是在整个实验中的大头。
A:探针一般都不会出什么问题的,质量都比较稳定。我觉得不同公司的探针差别主要还是染料的问题,像Vysis探针信号比较好,可能主要是因为用的他们的专利染料,序列方面我觉得差别可能不大。

Q:FISH的结果判断容易吗?我觉得核型分析的图可能就比较难判断一些。
A:FISH的结果就是看信号点的数量、融合和分离情况,都很好看的,照着说明书的阳性判别结果就可以了。不过有时候会出现一些说明书上没有的情况,我就经常碰到,但是别人国外已经就这些特别的情况做了研究,在98年的BLOOD上就进行了总结,所以一般都没有什么不好判断的。

Q:如果结果不理想,一般会从哪几个方面分析呢?
A:原因可能很多,要具体分析了,如果是背景很高的话,那可能是细胞数量高,杂质多,或者洗片的时候不充分;如果信号很弱的话,可能是洗片子过头,或者探针有问题,还有就是缓冲液、预处理液这些很重要,如果做不出来很可能是这些试剂配置出了问题。

Q:那种做得不好,看不出结果需要重做的情况多不多?
A:一般都做得出来,除非是我们对结果比较怀疑会自己重做一次看看。

Q:谢谢宋老师接受我们的访问,希望以后有机会能多向宋老师请教。
A:不客气,我也希望能借这个平台和其它的FISH专家多多交流。

(来源: 基因科技 )


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