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弓形虫抗体IgG(TOX Ab-IgG)检测

厦门慧嘉生物科技有限公司2009年10月13日 9:47 点击:1968

弓形虫抗体IgG(TOX Ab-IgG)检测

 

    [测定方法

    [方法学原理在微孔表面包被纯化的弓形体抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在弓形虫抗体IgG可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质,再加入酶联液,与抗原抗体复合物结合、洗去过量的酶联液。最后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中弓形虫抗体IgG含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比,读出结果。

    [标本准备静脉抽血2ml,不抗凝。

    [试剂]

    1.微孔板

    2.样品稀释液

    3HRP-抗人IgG酶结合物

    4.阴性对照

    5.阳性对照

    6.洗涤剂

    7TMB显色液

    [仪器设备酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [测定步骤)

    1.吸取5ul血清标本加入250ttl标本稀释液中,做151稀释。

    2.吸取100gl稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释),加入微孔板内,设空白对照1孔。振荡,混匀,去除孔内液体中气泡,室温环境中孵育20min

    3.弃去孔内液体,用洗涤液洗5次。

    4.每孔再加入100~1酶联结合物,室温环境中孵育20min

    5.弃去孔中酶联液,用洗涤液洗5次。

    6.每孔加入100gl TMB显色液,室温环境中孵育10min

    7.每孔加100ul终止液,终止反应,充分混匀。

    8.用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。

    [注意事项]

    1.整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定,严防交叉污染。

    2.所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。

    3.试剂应保存于28冰箱,使用前应在室温环境中平衡30min

    4.洗涤时各孔均应加满洗涤液,防止孔内有游离酶未洗净,每次洗板后均应在吸水纸上扣干。

    5.血标本应分离出血清保存,2—8可保存7d,冷冻保存可至6个月,避免反复冻融。

    6.试剂在储存或使用过程中,禁止过热、曝晒或强光。

    [正常参考值]  TOXAb-IgG阴性

    [临床意义弓形虫孕妇感染率为3%~5%,可引起胎儿先天性感染。妊娠期感染者可出现虫血症,弓形虫速殖子(滋养体)经胎盘感染胎儿,即垂直传播。一般在妊娠早期宫内感染概率为10%一25%,可导致流产、死胎或早产以及胎儿严重感染;妊娠中期和妊娠后期宫内感染概率为30%~60%,其中约10%可致多种先天性缺陷,而以脑和眼损害为多见,如小头畸形、大脑发育障碍、脑积水、视神经炎、视神经萎缩、眼组织缺损等。重症者新生儿期即可诊断,轻型无症状者在青春期后出现脉络膜视网膜炎、斜视、失明、精神障碍或弱智等。获得性感染即后天感染主要传播途径为经消化道及损伤的皮肤、黏膜以及输血和器官移植等,仅约10%的患者出现症状,可有无痛性淋巴结肿大、发热、咽痛、肌痛或腹痛,也可出现肺炎、心肌炎、多发性肌炎、眼结膜炎、脑膜脑炎等。

    TOXAb—IgM用于弓形虫急性感染的诊断,弓形虫IgG用于弓形虫既往感染的诊断,双份血清IgG抗体滴度4倍以上增高或单份血清IgG抗体滴度≥1512,近期感染可能性大。

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(来源: 厦门慧嘉生物科技有限公司


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