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巨细胞病毒抗体IgG(CMVAb-IgG)检测

厦门慧嘉生物科技有限公司2009年10月11日 9:45 点击:1623

巨细胞病毒抗体IgG(CMVAb-IgG)检测

 

    [测定方法

    [方法学原理在微孔表面包被纯化的巨细胞病毒抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在巨细胞病毒抗体-IgG可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质,再加入酶联液,与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。最后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中巨细胞病毒抗体-IgG含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比,读出结果。

    [标本准备静脉抽血2ml,不抗凝。

    [试剂]

    1.微孔板

    2.样品稀释液

    3HRP-抗人IgG酶结合物

    4.阴性对照

    5.阳性对照

    6.洗涤剂

    7TMB显色液

    8.终止液

    [仪器设备酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [测定步骤]

    1.吸取5u1血清标本加入250gl标本稀释液中,做151稀释。

    2。吸取l00ull稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释),加人微孔板内,设空白对照l孔。振荡,混匀,去除孔内液体中气泡,室温环境中孵育20min

    3,弃去孔内液体,用洗涤液洗5次。

    4。每孔再加入100gl酶联结合物,室温环境中孵育20min

    5。弃去孔中酶联液,用洗涤液洗5次。

    6,每孔加入100ul TMB显色液,室温环境中孵育10min

    ?。每孔加入100ul终止液,终止反应,充分混匀。

    8。用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。

    [注意事项]

    1.整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定,严防交叉污染。

    2.所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。

    3.试剂应保存于28冰箱,使用前应在室温环境中平衡30min

    4.洗涤时各孔均应加满洗涤液,防止孔内有游离酶未洗净,每次洗板后均应在吸水纸上拍干。

    5.血标本应分离出血清保存,28可保存?d,冷冻保存可至6个月,避免反复冻融。

    6.试剂在储存或使用过程中,禁止过热、曝晒或强光。   

    [正常参考值]  CMVAb—IgG阴性

    [临床意义巨细胞病毒可引起先天性和后天性多种感染。原发性感染可引起肝炎、传染性单核细胞增多症或输血后综合征。宫内感染则是由于孕妇体内的CMV通过胎盘使胎儿在宫内受染所致,是人巨细胞病毒感染的重要途径之一。受染胎儿多数为隐性感染,但有时后果较为严重,尤其是在怀孕早期,更易造成胎儿损害。出现小头畸形、肢体畸形、先天性心脏病、斜眼、失明、流产、死胎、早产等。

    CMVAb—IgM阳性表明新近存在CMV感染,对于婴幼儿患者可用于早期诊断。由于孕妇外周血IgM型抗体不能通过胎盘屏障,所以若新生儿脐血CMVAb—IgM检测阳性则可诊断CMV宫内感染(采集脐血标本时应注意避免母血污染)。婴幼儿外周仅血清单—CMV Ab-IgM检测阳性者,应连续随访612个月,观察其滴度是否有显著意义的升高。成人人群中CMV Ab-IgG检出率很高,CMVAb-IgG仅用于成人流行病学调查。

    另外,少部分患者再次感染巨细胞病毒时,可再次出现CMVAb-IgM阳性。特别是器官移植患者再次发生CMV感染时,CMVAb-IgM重新出现阳性的比例非常高。

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(来源: 厦门慧嘉生物科技有限公司


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