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抗体保存指南

济南超研生物技术有限公司2013年5月18日 11:17 点击:948

(一)保存温度和条件
对于很多抗体而言,分装成小等份并冻存于-20度或者-80度是最佳保存条件。分装成小等份可最大程度地减少由于冻融造成的损伤,以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需要冻融一次,如有剩余,可将剩余物保存到4度。在收到抗体时,在10000*g下离心20S以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液,并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10ul;等份越小,储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
在大多数情况下,收到抗体时在4度下保存一至两个周,然后再冷冻长期保存是可接受的,但也许腹水液是个例外,它可能包含蛋白酶,因而应该尽快冻存。同样,遵照说明上的建议是重要的。
其他特别条件:
1 )酶偶联抗体不应该冻存,而应该保存在4度。冻融不仅影响抗体结合能力,还会降低酶活。
2)无论偶联至荧光染料、酶还是生物素,偶联抗体都应该保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹。暴露于光线中将损害偶联物的活性,特别是荧光偶联物易受到光漂白的影响,在实验所有阶段均应避光。
3 )IgG3同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势,应始终保存于4度。

(二)叠氮化钠防止污染
为了防止微生物的污染,很多抗体制品中加入0.02-0.05(w/v)的叠氮化钠,这会标示在保存缓冲液一栏。
不使用叠氮化钠的情形:
1)如果用抗体染色或者处理活细胞,或用抗体进行体内研究,一定要使用不含叠氮化钠的制品。该抗菌剂对大多数其他生物都有毒性,它阻断细胞色素电子传递系统。
2)叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联,应该在偶联进行前去除。偶联后,抗体可保存于叠氮化钠中,除此之外,0.01%的硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,可以替代。
叠氮化钠的去除:
可通过透析或者凝胶过滤从抗体溶液中出去,IgG的分子量为150,000道尔顿(IgM为约600,000);叠氮化钠的分子量为65道尔顿。截留分子量为14,000道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化钠向外扩散。在保持于4度的磁性搅拌器上的烧杯中,每毫升抗体使用至少1L冷PBS并搅拌透析装置6小时。更换两次PBS,每次搅拌至少6小时。如果有可能,所有材料均应该灭菌并无菌操作。

(三)反复冻融可使抗体变性,导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。
保存于-20度对于大多数抗体是适当的;保存于-80度无明显优势。冰箱不能是无霜型。
(来源: 济南超研生物技术有限公司


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