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5-溴脱氧尿嘧啶核苷 40204ES60
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  • 5-溴脱氧尿嘧啶核苷 40204ES60

5-溴脱氧尿嘧啶核苷 40204ES60

产品报价:186元

更新时间:2019/11/20 17:42:12

地:美国

牌:Yeasen

号:40204ES60

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,不用本金就能赚钱的方法

公司名称: 上海翊圣生物科技有限公司

产品关键词: 标记细胞分裂、凋亡   检测DNA合成   细胞动力学   增殖细胞核抗原   5-溴脱氧尿嘧啶核苷  

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5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU)

5-溴脱氧尿嘧啶核苷

产品信息

产品名称          

产品编号

规格

储存

价格(元)

5-bromo-2'-deoxyuridine  (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

40204ES60

100mg

-20

186 

5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷40204ES801g-20536

5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

40204ES90

5g

-20

2136

产品描述

目前常用的细胞增殖标记物有4种,DNA聚合酶αDNA polymerase α),增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigenPCNA),Ki-675-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)。其中Brdu为组织细胞非内源性表达存在,应用相对较广。Brdu,也称为溴化去氧尿苷,一种合成的胸苷类似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂,凋亡等行为。在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载,然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记,ICCIHC法染色法显示增殖细胞。另外,还能同时结合其它细胞标记物,双重染色,来判断增殖细胞的种类,增殖速度等,对研究细胞动力学有着重要意义。

产品性质

中文别名(Chinese Synonym

5--1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖)尿嘧啶;5-溴脱氧尿苷;溴化去氧尿苷;

英文别名(English Synonym

Br-dU; BUdR; 5-BrdU;  5-Bromodeoxyuridine;

CAS号(CAS NO.

59-14-3

分子式(Formula

C9H11BrN2O5

分子量(Molecular Weight

307.10

外观(Appearance

白色或类白色粉末

熔点(Melting Point

187-189

纯度(Purity, HPLC

99%

溶解性(Solubility

溶于1M 氢氧化铵(50mg/ml),水(高达10mg/ml);溶于DMFDMSO,水(加热)(50-100mg/ml

结构式(Structure


运输和保存方法

冰袋运输。-20℃干燥保存,2年有效。

操作步骤

1.       Brdu储存液的准备


1X DPBS充分溶解适量的Brdu配置10 mg/ml的母液,过滤除菌后,按照0.5ml/管的量分装放在-20°C或者-80°C长期保存,避免反复冻融。Brdu储存液再融化后,4°C可稳定存放一周。

2.      体内Brdu标记

1)    腹腔注射法(常用):无菌的10 mg/ml(溶于DPBS)适合用于体内注射用。按照100-200 μl1-2 mgBrdu的量腹腔注射到小鼠体内。注意:最短在注射后0.5 h后在小肠,胸腺和骨髓瘤处就能检测到Brdu。而一般在注射后24 h内几乎所有组织都能检测到Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。

2)    根据自身的实验体系,在合适的时间点处死动物,摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的IHC染色步骤。

3.       体外Brdu标记(培养原代细胞或者细胞系)

注:总的来说,10 μMBrdu(稀释于培养液)是一个比较合适的方法用来标记不同物种来源的原代细胞或细胞系。当然,建议针对具体的实验体系优化方法。

1)    96孔板上按标准步骤进行细胞培养,培养时间一般为1-72 h

2)    Brdu工作液的准备:用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mM Brdu工作液。然后取10 μl 1 mMBrdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。37°C温热。

3)    100 μl/Brdu工作液的量进行细胞标记,37°C孵育60 min~过夜。同时设置非Brdu标记的细胞作为阴性对照。注意:最佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如,对于快速增殖细胞(如HL-60)有效孵育时间为30-45min;对于原代细胞(如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞)孵育时间可能需要24 h。细胞密度最好不要超过2x106cells/ml

4)    制备单细胞层玻片,使用以下任何一种方法:

a.        细胞离心涂片(cytospin)制备:使用细胞离心涂片机,将100μl标记好的细胞(浓度为:1-2 x106cells/ml)直接离心到干净,无脂肪,poly-L-lysin包被的玻片上,风干。

b.       细胞涂片(cell-smear)制备:取一小滴标记好的细胞悬液于干净,无脂肪,poly-L-lysin包被玻片的一端,然后用第二个干净玻片将其均匀涂布成一薄层。室温风干。

5)    将玻片置于70%冰乙醇放在-20°C固定20-30 min

6)    PBS清洗细胞3次,每次5min

7)    加入1.5M HCl中室温孵育30 min注意:DNA的变性对于Brdu染色的成功至关重要。

8)    吸去HClPBS清洗2次,每次5min

9)    进入后续ICC染色步骤。

4.       体外Brdu标记(组织薄片)

1)     Brdu工作液的准备:用组织细胞培养液按照1:30的比例稀释储存液得到1mMBrdu工作液。然后取10 -20 μl 1mMBrdu溶液直接加入1 ml组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液(37°C温热)完全浸泡组织。

2)     用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约1 mm厚,2 mm2大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片,利于维持组织的活力。

3)     转移组织薄片至预装有10 ml Brdu标记液的15 ml离心管内。于37°CO2 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变,取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的(常用的为2-4 h)。直接丢弃未用完的标记液。

4)     37°C PBS清洗组织薄片,每次5 min

5)     使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。

意事项

1)    了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2)    该品对肌体有不可逆损伤的可能性。使用时应穿防护服和戴手套。应避免吸入本品的粉尘。


上海翊圣生物科技有限公司

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