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Alkaline Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP)  小牛肠碱性磷酸酶10321ES80
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Alkaline Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶10321ES80

产品报价:936元

更新时间:2020/3/9 8:49:40

地:上海

牌:翊圣生物

号:10321ES80

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 上海翊圣生物科技有限公司不用本金就能赚钱的方法

产品关键词: 核酸内切酶   碱性磷酸酶   连接酶   不用本金就能赚钱的方法

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Alkaline Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP)

小牛肠碱性磷酸酶

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Alkaline   Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶

10321ES80

1000 U

936.00

产品描述

Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNARNA5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团,因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板,以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶,可以降解几乎所有磷酸单酯,但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

10321ES801000 U

10321-A

Alkaline Phosphatase (30 U/μL)

1000 U

10321-B

10×AP buffer

1 mL

产品性质

来源(Source

携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母

质量控制(Quality Control

无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染

热灭活(Thermal Inactivation

在螯合剂存在下,65℃加热30 min99%活性不可逆丧失;使用苯酚,可使酶完全失活。

储存液条件(Storage   conditions

10 mM Tris-HClpH8.0),1 mM MgCl250 mM KCl0.1 mM   ZnCl250% glycerol.

活性定义(Unit definition

pH9.837℃条件下,以对硝基苯酚磷酸盐(p-nitrophenylphosphate)为底物,1分钟生成1 μmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。

最佳pHOptimal   pH

该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH10,在底物浓度低时,最佳pH8,此时该酶活性较高浓度底物时稍低。

优化体系(Optimal Buffer

AP Buffer500 mM Tris-HCl pH9.010 mM   MgCl2

运输和保存方法

干冰运输。-20℃保存,本酶在保存条件下极其稳定。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1 DNA去磷酸化

1.5 mL离心管中加入下列试剂:

组分

体积

无菌ddH2O

Up to 50 μL

DNA 片段*

1-20 pmol

Alkaline   Phosphatase

1-2   μL

10×AP buffer

5 μL

*单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育,平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。

混匀上述试剂,于37℃50℃孵育30 min。或者37℃孵育15 min后,再于50℃孵育15 min

2 酚氯仿法抽提DNA

苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提2次。

推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA0.5% SDS50 μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30 min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10 min,灭活效果更佳。

氯仿/异戊醇(24:1)抽提。

3 乙醇沉淀DNA

加入2.5 μL 3 M NaCl(终浓度150 mM)。

加入125 μL2.5倍体积)预冷乙醇,混匀后于-20℃放置30-60 min,沉淀DNA

4 溶解DNA

离心,彻底去除乙醇后,将DNA溶于适量去离子水(<20 μL)。

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货号

规格

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Shrimp   Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/μl) 虾碱性磷酸酶

10322ES72

250 U

656.00

Exonuclease   I (E. coli)  I型核酸外切酶

10320ES81/93

1500 U/15000 U

363.00/2363.00

HB190129

 


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